ข่าว

Javascript ถูกปิดใช้งานในเบราว์เซอร์ของคุณคุณลักษณะบางอย่างของเว็บไซต์นี้จะไม่ทำงานหากปิดใช้งาน JavaScript
ลงทะเบียนด้วยรายละเอียดเฉพาะของคุณและยาที่คุณสนใจ แล้วเราจะจับคู่ข้อมูลที่คุณให้ไว้กับบทความในฐานข้อมูลที่กว้างขวางของเรา และส่งอีเมลสำเนา PDF ให้คุณทันที
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, แผนกโรคติดเชื้อ, โรงพยาบาลในเครือมหาวิทยาลัยซูโจวแห่งแรก, เมืองซูโจว, มณฑลเจียงซู, 215000 โทร.เนื้องอกของระบบย่อยอาหารที่มีอัตราการรอดชีวิตโดยรวม 5 ปีที่ 14.1%ผู้ป่วยจำนวนมากที่เป็นโรค HCC ได้รับการวินิจฉัยว่าอยู่ในระยะลุกลาม ดังนั้น การตรวจคัดกรองตั้งแต่เนิ่นๆ จึงมีความจำเป็นในการลดอัตราการเสียชีวิตจากจุดตรวจ HCCนอกเหนือจากตัวบ่งชี้การตรวจหาที่ใช้กันทั่วไป เช่น alpha-fetoprotein ในซีรัม (AFP) เลนส์ lectin-reactive alpha-fetoprotein (AFP-L3) และ prothrombin ที่ผิดปกติ (โปรตีนที่เกิดจากการขาดวิตามิน K II, PIVKA-II) เทคนิคการตรวจชิ้นเนื้อของเหลว แสดงให้เห็นว่ามีค่าการวินิจฉัยในการตรวจหาจุดตรวจ HCCการตรวจชิ้นเนื้อของเหลวสามารถตรวจพบสารก่อมะเร็งที่ไหลเวียนอยู่เมื่อเปรียบเทียบกับขั้นตอนการบุกรุกเทคนิคการตรวจชิ้นเนื้อของเหลวจะตรวจหาเซลล์เนื้องอกที่ไหลเวียน การหมุนเวียน DNA ของเนื้องอก การหมุนเวียน RNA และ exosomes และใช้สำหรับการตรวจคัดกรอง วินิจฉัย และประเมินผลการพยากรณ์โรคของ HCC ในระยะเริ่มต้นบทความนี้ทบทวนชีววิทยาระดับโมเลกุลและการประยุกต์ใช้เทคนิคการตรวจชิ้นเนื้อของเหลวต่างๆ เพื่อแยกตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่อาจเป็นทางเลือกที่เหมาะสมสำหรับการประเมิน HCC ในระยะเริ่มต้น เพื่อปรับปรุงการตรวจคัดกรองกลุ่ม HCC ที่มีความเสี่ยงสูงในระยะเริ่มต้นคำสำคัญ: เทคนิคการตรวจชิ้นเนื้อของเหลว มะเร็งตับ กลุ่มที่มีความเสี่ยงสูง
มะเร็งตับ (Hepatocellular carcinoma - HCC) เป็นเนื้องอกมะเร็งที่พบได้บ่อยในทางเดินอาหาร ซึ่งอยู่ในอันดับที่ 6 ในบรรดากรณีใหม่ของเนื้องอกมะเร็งในทั้งชายและหญิง1 ทั่วโลก มะเร็งตับเป็นสาเหตุอันดับสามของการเสียชีวิตด้วยโรคมะเร็ง รองจากมะเร็งปอดและมะเร็งลำไส้ใหญ่ โดยคิดเป็น 8.3% ของการเสียชีวิตที่เกี่ยวข้องกับมะเร็งจากเนื้องอกที่เป็นมะเร็งทั้งหมด1 การพยากรณ์โรคของ HCC มีความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับระยะที่วินิจฉัยสาเหตุหลักของการรอดชีวิตที่ไม่ดีใน HCC คือการแพร่กระจายในตับ เนื้องอกในหลอดเลือดดำพอร์ทัล และการแพร่กระจายที่ห่างไกลออกไปซึ่งไม่รวมถึงการผ่าตัด และลักษณะหลายอย่างเหล่านี้มีอยู่แล้วในผู้ป่วยในขณะที่ทำการวินิจฉัย
ตามแนวทางการวินิจฉัยและการรักษา ปัจจัยเสี่ยงหลักในการพัฒนา HCC ได้แก่ โรคตับแข็ง การติดเชื้อไวรัสตับอักเสบบีเรื้อรัง (HBV) หรือไวรัสตับอักเสบซี (HCV) โรคไขมันพอกตับจากแอลกอฮอล์ และโรคไขมันพอกตับที่ไม่มีแอลกอฮอล์ (NAFLD) ).2 นอกจากนี้ ปัจจัยเสี่ยงสำหรับ HCC ได้แก่ การรับประทานอาหารที่ปนเปื้อนอะฟลาทอกซิน โรคกระดูกพรุน สาเหตุอื่นๆ ของโรคตับแข็ง ประวัติครอบครัวเป็นมะเร็งตับ เบาหวาน โรคอ้วน การสูบบุหรี่ และการบาดเจ็บที่ตับจากยากลุ่มที่มีความเสี่ยงสูงอายุ 35 และ 45 ปีควรได้รับการตรวจสุขภาพเป็นประจำการตรวจคัดกรองตั้งแต่เนิ่นๆเป็นกลยุทธ์การรักษาตั้งแต่เนิ่นๆ ที่สำคัญในการปรับปรุงการรอดชีวิตโดยรวมของผู้ป่วย HCC
แนะนำให้ใช้ไบโอมาร์คเกอร์ เช่น AFP, AFP-L3 และ PIVKA-II สำหรับการตรวจคัดกรอง HCC3,4 ในระยะเริ่มต้นเทคนิคการตรวจชิ้นเนื้อของเหลวได้แสดงให้เห็นผลลัพธ์ที่ดีในการวินิจฉัยและประเมินการรักษาในระยะเริ่มต้น5,6 มีความคืบหน้าอย่างมีนัยสำคัญในการตรวจชิ้นเนื้อของเหลว HCC ซึ่งอาจมีความไวและความจำเพาะสูงกว่าเครื่องหมายในซีรัมที่ใช้กันทั่วไป เช่น AFP (ตารางที่ 1)
AFP เป็นไบโอมาร์คเกอร์ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายใน HCC และปัจจุบันเป็นไบโอมาร์คเกอร์ที่มีรายละเอียดมากที่สุดที่ใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการตรวจคัดกรอง วินิจฉัย และประเมินโรคในระยะเริ่มต้นระดับ AFP ที่เพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่องถือเป็นปัจจัยเสี่ยงสำหรับความก้าวหน้าของ HCC7.8 อัตราการตรวจพบมะเร็งตับขนาดเล็ก (sHCC) เพิ่มขึ้นตามการพัฒนาของอัลตราซาวนด์และการตรวจเอกซเรย์คอมพิวเตอร์ และพบว่า AFP ไม่ไวต่อการตรวจหา hHCC ในการปฏิบัติทางคลินิกเป็นพิเศษจากการศึกษาแบบหลายศูนย์ย้อนหลัง 9 พบว่า AFP เป็นบวกใน 46% (616/1338) ของกรณี HCC และ 23.4% (150/641) ของ sHCC caseนอกจากนี้ ระดับ AFP ยังสูงขึ้นในผู้ป่วยโรคตับเรื้อรังและโรคตับแข็ง10 ดังนั้น AFP จึงมีผลการคัดกรองที่จำกัดสำหรับ sHCC11 ตามแนวทางปฏิบัติทางคลินิกในภูมิภาคเอเชียแปซิฟิกสำหรับมะเร็งตับ เราไม่แนะนำให้ใช้ AFP12 หลักฐานทางคลินิกชี้ให้เห็นว่า PIVKA-II เหนือกว่า AFP ในการรักษา HCC และการรวมกันของ PIVKA-II และ AFP มี ค่าการวินิจฉัยที่สูงขึ้นใน HCC13 เมื่อเทียบกับการตรวจชิ้นเนื้อเนื้อเยื่อ การตรวจชิ้นเนื้อของเหลวจะตรวจหาสารที่เกี่ยวข้องกับเนื้องอกในของเหลวในร่างกายเป็นหลัก (เลือด น้ำลาย น้ำในเยื่อหุ้มปอด น้ำไขสันหลัง หรือปัสสาวะ) เป็นหลัก และแพร่กระจายไปยังเนื้อเยื่อได้น้อยกว่า14 นอกจากนี้ การตรวจชิ้นเนื้อของเหลวอาจสะท้อนถึงลักษณะร้ายที่ไม่มีอยู่ในเนื้อเยื่อเนื้องอกปฐมภูมิ15 การตรวจชิ้นเนื้อของเหลวยังไม่ได้รับการทดสอบในการปฏิบัติทางคลินิกสำหรับเนื้องอกทุกประเภท แต่ศักยภาพในการวินิจฉัยโรคมะเร็งกำลังดึงดูดความสนใจของผู้เชี่ยวชาญด้านเนื้องอกวิทยา16 การตรวจชิ้นเนื้อของเหลวสามารถตรวจจับเซลล์เนื้องอกที่ไหลเวียน (CTCs), DNA เนื้องอกที่ไหลเวียน (cDNA), การหมุนเวียน RNA อิสระ (ecRNA) และ exosomesในบทความนี้ เราจะพูดถึงลักษณะ บทบาท และการประยุกต์ใช้เทคนิคการตรวจชิ้นเนื้อของเหลวต่างๆ ในการตรวจคัดกรองเบื้องต้นของกลุ่ม HCC ที่มีความเสี่ยงสูง
ดีเอ็นเอนอกเซลล์ (cfDNA) ในตัวอย่างเลือดจากบุคคลที่มีสุขภาพดีได้รับการอธิบายครั้งแรกในปี 1948 โดย Mandel et al17 cfDNA เป็นชิ้นส่วน DNA ที่ปราศจากเซลล์ซึ่งมีความยาวประมาณ 160–180 bp โดยมีต้นกำเนิดมาจากเซลล์ลิมโฟไซต์และเซลล์มัยอีลอยด์เป็นหลักctDNA คือชิ้นส่วนดีเอ็นเอกลายพันธุ์ที่จำเพาะที่เซลล์เนื้องอกปล่อยออกมาในเลือดส่วนปลาย ซึ่งแสดงถึงข้อมูลจีโนมของเซลล์เนื้องอกหลังจากกระบวนการทางพยาธิสรีรวิทยาบางอย่าง รวมถึงเนื้อร้าย การตายของเซลล์ตาย และการขับถ่ายสัดส่วนของ ctDNA ใน cfDNA ทั้งหมดแตกต่างกันไปตามชนิดของเนื้องอก และชิ้นส่วน cDNA มักมีความยาวน้อยกว่า 167 bp18 การศึกษาของ Underhill แสดงให้เห็นว่าชิ้นส่วน cfDNA โดยทั่วไปจะสั้นกว่า cfDNA ปกติ 19 เมื่อเทียบกับบุคคลที่มีสุขภาพดี ความยาวรวมของชิ้นส่วน cfDNA ในเลือดของผู้ป่วยมะเร็งจะสั้นกว่า ดังนั้น cfDNA จึงสามารถใช้เป็นตัวบ่งชี้การตรวจคัดกรองเนื้องอกในระยะเริ่มต้นได้การเพิ่มความยาวของส่วนย่อยของ cfDNA บางส่วนสามารถปรับปรุงการตรวจหา cDNA ที่เกี่ยวข้องกับเนื้องอกที่เป็นของแข็งที่ไม่แพร่กระจายได้การศึกษาพบว่า ctDNA พบได้ในมะเร็งตับอ่อน ลำไส้ใหญ่ กระเพาะปัสสาวะ ทางเดินอาหาร ตับ รังไข่ มะเร็งเต้านม มะเร็งผิวหนัง มะเร็งศีรษะและลำคอมากกว่า 75%20,21 อย่างไรก็ตาม ปริมาณของ ctDNA ในเลือดขึ้นอยู่กับตำแหน่งของเนื้องอก22 ในการศึกษาโดย Bettegoud ผู้ป่วยมะเร็งลำไส้ใหญ่ เต้านม ตับ ปอด และต่อมลูกหมาก พบว่ามี cDNA ในเลือดสูงกว่ามะเร็งชนิดอื่นๆในทางตรงกันข้าม ในผู้ป่วยมะเร็งช่องปาก มะเร็งตับอ่อน มะเร็งกระเพาะอาหาร และมะเร็งไกลโอมา ความเข้มข้นของ cDNA ในเลือดลดลงยี่สิบเอ็ด
เนื่องจาก ctDNA มีการกลายพันธุ์ทางพันธุกรรมที่เหมือนกันกับเซลล์เนื้องอกปฐมภูมิ จึงสามารถใช้ cDNA เพื่อตรวจหาการกลายพันธุ์ที่จำเพาะของเนื้องอกที่ต่างกันและการเปลี่ยนแปลงของอีพีเจเนติกส์ ซึ่งรวมถึงเมทิเลชัน ไฮดรอกซีเมทิเลชัน การแปรผันของนิวคลีโอไทด์เดี่ยว และการแปรผันของจำนวนสำเนายี่สิบสาม
DNA methylation เป็นหนึ่งในการเปลี่ยนแปลงของ epigenetic ที่พบบ่อยที่สุดซึ่งส่งผลให้เกิดการกดขี่ของยีนเมื่อเทียบกับเซลล์ปกติ จะมีความแตกต่างในระดับโดยรวมของ methylation ของจีโนมเซลล์เนื้องอก โดยเฉพาะอย่างยิ่งใน methylation ของยีนต้านเนื้องอก ซึ่งสามารถตรวจพบได้ในระยะเริ่มแรก บ่งบอกว่าการเปลี่ยนแปลงของ DNA methylation อาจเป็นตัวบ่งชี้ในระยะเริ่มต้น การตรวจหาเนื้องอกยีนต้านเนื้องอกที่เกี่ยวข้องกับ HCC สามารถปิดใช้งานได้โดยโปรโมเตอร์เมทิลเลชันซึ่งจะช่วยกระตุ้นการสร้างเนื้องอก24 DNA methylation เป็นเครื่องหมายในอุดมคติสำหรับการวินิจฉัยเนื้องอกในระยะแรกเนื่องจากความจำเพาะของเนื้อเยื่อ การตรวจหา และความเป็นอิสระของอายุนอกจากนี้ DNA methylation ยังพบได้บ่อยกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับการกลายพันธุ์ของโซมาติก เนื่องจากมีบริเวณเป้าหมายมากกว่าและไซต์ CpG ที่เปลี่ยนแปลงหลายแห่งในแต่ละภูมิภาคของจีโนมเป้าหมาย25 นอกเหนือจากไซต์ CpG หลายแห่งแล้ว ยังมีการระบุตำแหน่งไฮเปอร์เมทิลเลตอิสระจำนวนมากใน ctDNA ใน DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 และ RGS10.26 Xu et alการเปรียบเทียบตัวอย่าง cfDNA จากผู้ป่วย HCC 1,098 รายและกลุ่มควบคุมที่มีสุขภาพดี 835 รายเป็นยีนที่เกี่ยวข้องกับ HCC พบว่ามีความสัมพันธ์อย่างมากกับลายเซ็น cDNA methylation ในพลาสมาที่สอดคล้องกัน25 จากการวิเคราะห์ในห้องปฏิบัติการ ได้มีการพัฒนาแบบจำลองการทำนายซึ่งมีเครื่องหมายเมทิลเลชั่น 10 ตัวที่มีความไวและความจำเพาะ 85.7% และ 94.3% ตามลำดับ และเครื่องหมายเหล่านี้มีความสัมพันธ์สูงกับมวลเนื้องอก ระยะของเนื้องอก และการตอบสนองต่อการรักษาผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่าการใช้ cDNA methylation markers ถือเป็นคำมั่นสัญญาที่ดีในการวินิจฉัย การเฝ้าติดตาม และการพยากรณ์โรคของ HCCในแบบจำลองเมทิลเลชันที่ประกอบด้วยยีนที่มีเมทิลเลตผิดปกติสามตัว (APC, COX2, RASSF1A) และหนึ่ง miRNA (miR203) ที่นำเสนอโดย Lu et al27 ความไวและความจำเพาะของแบบจำลอง 27 สำหรับการวินิจฉัย HCC ที่เกี่ยวข้องกับ HBV นั้นเปรียบเทียบได้80%.นอกจากนี้ แบบจำลองนี้สามารถตรวจหา 75% ของผู้ป่วย HCC ที่ไม่ได้รับการวินิจฉัยด้วยระดับ AFP ที่ 20 ng/mLยีนสำหรับโปรตีน 1A ของตระกูลโดเมนที่เกี่ยวข้องกับ Ras (RASSF1A) เป็นลำดับดีเอ็นเอที่ทำซ้ำหลักในจีโนมมนุษย์Araujo และคณะสรุปว่าไฮเปอร์เมทิลเลชันของโปรโมเตอร์ RASSF1A อาจเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่มีคุณค่าสำหรับการตรวจคัดกรอง HCC ในระยะเริ่มต้นและเป้าหมายระดับโมเลกุลที่เป็นไปได้สำหรับการบำบัดด้วยอีพีเจเนติก28 ในการศึกษาหนึ่ง ซีรั่ม RASSF1A โปรโมเตอร์ hypermethylation พบใน 73.3% ของผู้ป่วย HCC29 องค์ประกอบนิวคลีโอไทด์ที่กระจายตัวยาว 1 (LINE-1) เป็นตัวกลางการรีโทรทรานส์โพซิชันที่มีฤทธิ์สูงอีกชนิดหนึ่งHypomethylation ของ LINE-1 พบใน DNA ของตัวอย่างซีรั่ม HCC 66.7% และสัมพันธ์กับการกลับเป็นซ้ำในระยะเริ่มต้นและการรอดชีวิตที่ไม่ดีหลังการผ่าตัดที่รุนแรง29 Hypermethylation เป็นกระบวนการทางพันธุกรรมทั่วไปที่มีบทบาทเฉพาะในการพัฒนาตับแข็งในตับและ HCC30 ในทางตรงกันข้าม ไฮดรอกซีเมทิลเลชันเป็นกระบวนการดีเมทิลเลชันที่กระตุ้นการกระตุ้นและการแสดงออกของยีนอีกครั้ง และการตรวจจับผลิตภัณฑ์ 5-ไฮดรอกซีเมทิลไซโตซีน (5-hmC) ในกระบวนการนี้สามารถใช้เพื่อระบุเนื้องอกได้เมทิลเลชันและไฮดรอกซีเมทิลเลชันของ cDNA สัมพันธ์กับการเกิดเนื้องอกและอาจนำไปสู่การตรวจคัดกรอง HCC ในระยะเริ่มต้นในการศึกษากลุ่มตัวอย่างปี 2554 พบ 31 ยีนกว้าง 5-hmCs ในตัวอย่าง cfDNA และ 32 ยีนถูกระบุโดยการเปรียบเทียบลำดับ 5-hmC ในผู้ป่วย HCC และกลุ่มที่มีความเสี่ยงสูง เช่น ผู้ที่มีโรคเรื้อรังแบบจำลองการวินิจฉัยโรคตับและโรคตับแข็งโมเดลนี้ดีกว่า AFP ในการแยกแยะ HCC จากเนื้อเยื่อที่ไม่ใช่เนื้องอก
การกลายพันธุ์ในบริเวณการเข้ารหัสสามารถนำไปสู่ความผิดปกติในการถอดรหัส ซึ่งสามารถนำไปสู่การเปลี่ยนแปลงในลำดับโปรตีนและมะเร็งในท้ายที่สุดแวเรียนต์ของนิวคลีโอไทด์เดี่ยวเป็นตัวบ่งชี้จีโนมที่สำคัญสำหรับการตรวจคัดกรองเนื้องอกในระยะแรกเนื่องจากความน่าเชื่อถือของเนื้อเยื่อสูงและความจำเพาะของเนื้องอกและเนื้อเยื่อสูงการศึกษาที่เกี่ยวข้องกับ HCC จำนวนมากโดยใช้การจัดลำดับรุ่นต่อไป (NGS) สำหรับการจัดลำดับจีโนมทั้งแบบภายนอกและแบบกลุ่มของมะเร็งได้ระบุยีนในเซลล์ที่กลายพันธุ์ทั่วไป เช่น TP53 และ CTNNB1 รวมถึงอีกหลายอย่างรวมถึง ARID1A, MLL, IRF2ยีนใหม่ ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 และ JAK1 แสดงอัตราการกลายพันธุ์ในระดับปานกลาง การวิเคราะห์ฟังก์ชันของยีนกลายพันธุ์แสดงให้เห็นว่าการเปลี่ยนแปลงในการเปลี่ยนแปลงของโครมาติน, การแปลงสัญญาณ Wnt/β-catenin และ JAK/STAT, วิถีวงจร P53-cell, ตัวดัดแปลง epigenetic, เส้นทางความเครียดออกซิเดชัน, เส้นทาง PI3K/AKT/MTOR และ RAS/RAF/ เส้นทางไคเนสของ MAPK มีบทบาทสำคัญในการสร้างเนื้องอก HCC 32,33 ในการศึกษาที่ตรวจพบการกลายพันธุ์ที่เกี่ยวข้องกับเนื้องอก Huang และคณะพบว่าความถี่ของการกลายพันธุ์ที่เกี่ยวข้องกับเนื้องอกขึ้นอยู่กับ ctDNA คือ 19.5% และความจำเพาะ 90% .34 นอกจากนี้ ผู้ป่วยที่ได้รับการบุกรุกของหลอดเลือดมีแนวโน้มที่จะมีการกลายพันธุ์ของ ctDNA (P=0.041) และอัตราการรอดชีวิตที่ไม่เกิดซ้ำที่สั้นกว่า (P<0.001) การวิเคราะห์ฟังก์ชันของยีนกลายพันธุ์แสดงให้เห็นว่าการเปลี่ยนแปลงในการเปลี่ยนแปลงของโครมาติน, การแปลงสัญญาณ Wnt/β-catenin และ JAK/STAT, วิถีวงจร P53-cell, ตัวดัดแปลง epigenetic, เส้นทางความเครียดออกซิเดชัน, เส้นทาง PI3K/AKT/MTOR และ RAS/RAF/ เส้นทางไคเนสของ MAPK มีบทบาทสำคัญในการสร้างเนื้องอก HCC 32,33 ในการศึกษาที่ตรวจพบการกลายพันธุ์ที่เกี่ยวข้องกับเนื้องอก Huang และคณะพบว่าความถี่ของการกลายพันธุ์ที่เกี่ยวข้องกับเนื้องอกขึ้นอยู่กับ ctDNA คือ 19.5% และความจำเพาะ 90% .34 นอกจากนี้ ผู้ป่วยที่ได้รับการบุกรุกของหลอดเลือดมีแนวโน้มที่จะมีการกลายพันธุ์ของ ctDNA (P=0.041) และอัตราการรอดชีวิตที่ไม่เกิดซ้ำที่สั้นกว่า (P<0.001)การวิเคราะห์การทำงานของยีนกลายพันธุ์แสดงให้เห็นว่าการเปลี่ยนแปลงในการเปลี่ยนแปลงของโครมาติน, การส่งสัญญาณ Wnt/β-catenin และ JAK/STAT, วิถีของวัฏจักรเซลล์ P53, ตัวดัดแปลง epigenetic, เส้นทางความเครียดออกซิเดชัน, เส้นทาง PI3K/AKT/MTOR และเส้นทาง RAS/RAF/ MAPK ไคเนส บทบาทที่สำคัญในการเกิดเนื้องอกของ HCC 32,33 ในการศึกษาที่พบการกลายพันธุ์ที่เกี่ยวข้องกับเนื้องอก Huang et al.พบว่าความถี่ของการกลายพันธุ์ที่เกี่ยวข้องกับเนื้องอกที่ขึ้นกับ ctDNA เท่ากับ 19.5% และความจำเพาะ 90%.34 Кроме того, у пациентов с сосудистой инвазией чаще встречались мутациси цДНК (P=0,041) และ болетик ков. .34 นอกจากนี้ ผู้ป่วยที่มีการบุกรุกของหลอดเลือดมีการกลายพันธุ์ของ cDNA มากกว่า (P=0.041) และการรอดชีวิตที่ปราศจากโรคได้สั้นลง (P<0.001)การวิเคราะห์หน้าที่ของยีนกลายพันธุ์เผยให้เห็นการเปลี่ยนแปลงของโครมาติน, การส่งสัญญาณ Wnt/β-catenin และ JAK/STAT, วิถีของวัฏจักรเซลล์ P53, ตัวดัดแปลง epigenetic, วิถีความเครียดออกซิเดชัน, ทางเดิน PI3K/AKT/MTOR และ RAS/RAF/MAPK เส้นทางไคเนสมีบทบาทสำคัญในการสร้างมะเร็งของ HCC 32,33 在一项检测到肿瘤相关突变的研究中，หวง 等人发现肿瘤相关突变依赖于ctDNA 的频率为19.5%，特异性为90% .34 此外，经历血管侵犯的患者更有可能发生ctDNA突变（P=0.041）和更短的无复发生存期（P<0.001)。 32.33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 研究 ， huang 等 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 ctdna 的 为 为 19.5% ， 特异性 为 90% .34 此外 经历 血管 侵犯 的 更 可能 发生 ctdna突变（P=0.041）和更短的无复发生存期（P<0.001)。32,33 ในการศึกษาที่พบการกลายพันธุ์ที่เกี่ยวข้องกับเนื้องอก Huang et al.พบว่าการกลายพันธุ์ที่เกี่ยวข้องกับเนื้องอก 19.5% ขึ้นอยู่กับ cDNA โดยมีความเฉพาะเจาะจงที่ 90% 34 นอกจากนี้ ผู้ป่วยที่ได้รับการบุกรุกของหลอดเลือดมีแนวโน้มที่จะพัฒนา cDNAмутация (P = 0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001) การกลายพันธุ์ (P=0.041) และการรอดชีวิตที่ปราศจากโรคที่สั้นกว่า (P<0.001)ยีนไดรเวอร์ HCC ทั่วไปอีกตัวหนึ่งคือ TP53 ซึ่งมีอัตราการกลายพันธุ์มากกว่า 30%การศึกษาพบว่าความถี่ของการกลายพันธุ์ TP53 ใน ctDNA ในเลือดและปัสสาวะมีตั้งแต่ 5% ถึง 60%35 การศึกษาของ Johan พบว่าสเปกตรัมการกลายพันธุ์ ctDNA ใน HCC ตอนปลายมีอัตราการกลายพันธุ์ที่ใกล้เคียงกับ HCC ในระยะแรก ซึ่งรวมถึงโปรโมเตอร์ TERT (51%) TP53 (32%) CTNNB1 (17%) PTEN (8%) การกลายพันธุ์ใน แอกซิน1 ., ARID2, KMT2D และ TSC2 (6% ต่ออัน)36 เนื้องอก β-catenin (CTNNB1) มีบทบาทสำคัญในเส้นทางการส่งสัญญาณ Wntตัวกระตุ้นร่วมการถอดรหัส CTNNB1 สามารถส่งเสริมการแสดงออกของยีน ซึ่งสามารถนำไปสู่การงอกขยายของเซลล์ การยับยั้งการตายของเซลล์ และการสร้างเส้นเลือดใหม่CTNNB1 ยังสามารถโต้ตอบกับ TERT เพื่อกระตุ้นการเปลี่ยนแปลงของเซลล์ตับ33 โปรโมเตอร์ TERT มักกลายพันธุ์ในเนื้องอกบางชนิดการเปลี่ยนแปลงใน TERT ซึ่งเป็นหนึ่งในการเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรมที่เร็วที่สุดในการเปลี่ยนแปลงของ HCC ที่เป็นมะเร็ง อาจนำไปสู่การกระตุ้นการทำงานของ Telomerase ในตับตับแข็งและอาจส่งเสริมการเพิ่มจำนวนและป้องกันการแก่ก่อนวัยมีรายงานว่าการกลายพันธุ์ในโปรโมเตอร์ 33-37 TERT เกิดขึ้นใน 59-90% ของผู้ป่วยที่มีก้อนเนื้องอกในตับและ HCC ในระยะแรก และเกี่ยวข้องกับการอยู่รอด38
การเปลี่ยนแปลงจำนวนสำเนา (CNA) เป็นประเภทย่อยที่สำคัญของการกลายพันธุ์ของโซมาติกการวิจัยแสดงให้เห็นว่าภาระที่แพร่หลายและเป็นจุดศูนย์กลางของ CNA เป็นลักษณะเฉพาะของจีโนมที่สามารถทำนายการแทรกซึมของภูมิคุ้มกันของเนื้องอกและการยกเว้นในมะเร็งบางชนิดได้39 การส่งสัญญาณการแทรกซึมแบบแอคทีฟ กิจกรรมการสลายเซลล์สูง การอักเสบที่รุนแรง และตัวบ่งชี้ทางพันธุกรรมที่เกี่ยวข้องกับการนำเสนอแอนติเจนใน HCCการวิเคราะห์อาร์เรย์ข้อมูลของ single nucleotide polymorphisms ในอาสาสมัคร 477 คนพบว่า CNS มีภาระน้อยในทางตรงกันข้าม เนื้องอกที่ไม่เสถียรของโครโมโซมที่มีโหลด CNA อย่างกว้างขวางสูงแสดงสัญญาณของการปฏิเสธภูมิคุ้มกันและเกี่ยวข้องกับการเพิ่มจำนวน การซ่อมแซม DNA และความผิดปกติของ TP53Xu และคณะพบว่ากลุ่ม HCC มีคะแนน CNA สูงกว่ากลุ่มโรคตับเรื้อรัง40 โดยใช้การจัดลำดับจีโนมทั้งหมดของเซลล์เดียว พบว่า CNAs ปรากฏขึ้นในช่วงต้นของการเกิดมะเร็งตับและยังคงค่อนข้างคงที่ในระหว่างการลุกลามของเนื้องอก41 ชุงและคณะพบว่าระดับ cfDNA สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในผู้ป่วย HCC และ CNA ทั่วทั้งจีโนมใน cfDNA เป็นตัวบ่งชี้การพยากรณ์โรคที่เป็นอิสระที่สำคัญในผู้ป่วย HCC ที่ได้รับการรักษาด้วย sorafenib42 ผู้ป่วยที่มีภาระ CNA สูงกว่ามีแนวโน้มที่จะมีความก้าวหน้าของโรคและการเสียชีวิตมากกว่าผู้ที่มีภาระ CNA ต่ำกว่าOllerich และคณะพบว่าดัชนีความไม่แน่นอนของจำนวนสำเนา (CNI) สามารถใช้ในการประเมิน CNA ใน cfDNA ของผู้ป่วยมะเร็งได้พวกเขาตั้งข้อสังเกตว่าผู้ป่วยมะเร็งขั้นสูงมีคะแนน CNI สูงกว่ากลุ่มควบคุมอย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งประเมินการตอบสนองของผู้ป่วยต่อเคมีบำบัดที่เป็นระบบและภูมิคุ้มกันบำบัด43 ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า CNA ที่พบในตัวอย่างชิ้นเนื้อของเหลวอาจเป็นตัวบ่งชี้การพยากรณ์โรคในผู้ป่วยมะเร็งระยะลุกลามHCC บนพื้นหลังของการบำบัดด้วยระบบ
ในปัจจุบัน วิธีการที่ใช้ในการตรวจหา ctDNA สามารถแบ่งออกเป็นวิธีการที่กำหนดเป้าหมายและไม่กำหนดเป้าหมายโดยสังเขป วิธีการที่เป็นเป้าหมาย เช่น ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์ดิจิทัล (dPCR), BEAMing digital PCR, Amplification Refractory Mutation System-PCR, Capp-Seq และ Tam-Seq มีความไวสูงต่อยีนที่กำหนดไว้ล่วงหน้าวิธีการนอกเป้าหมาย เช่น การจัดลำดับจีโนมทั้งหมดและ NGS ให้มุมมองที่ครอบคลุมของภูมิทัศน์จีโนมทั้งหมด44 เมื่อเทียบกับแผงเป้าหมาย การจัดลำดับจีโนมทั้งหมดสามารถตรวจจับไม่เพียงแต่การกลายพันธุ์ของจุดและการแทรกเท่านั้น แต่ยังรวมถึงการจัดเรียงใหม่และการแปรผันของจำนวนสำเนาการพยากรณ์โรค และ CTC และ cfDNA เป็นตัวบ่งชี้ที่ดีที่สามารถใช้สำหรับการตรวจสอบ HCC แบบไดนามิก45 นอกจากนี้ การวิเคราะห์ cfDNA อาจมีประโยชน์มากกว่าในการตรวจหา HCCYan และคณะแสดงให้เห็นว่า cfDNA ในพลาสมาของผู้ป่วยที่มี HCC สูงกว่าในผู้ป่วยที่เป็นพังผืดในตับและกลุ่มควบคุมที่มีสุขภาพดีอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับ AFP คาดว่า ctDNA จะเป็นตัวทำเครื่องหมายการคัดกรองที่ดีกว่าสำหรับ HCC ในระยะแรก46 ในการศึกษาในอนาคตของการตรวจชิ้นเนื้อของเหลว 47 ชิ้นที่ทดสอบ cfDNA และโปรตีนในกลุ่มประชากร พบว่ามีประสิทธิภาพในการแยกแยะผู้ป่วยที่มี HCC ออกจากผู้ป่วยที่ไม่มี HCCในการติดตามผู้ป่วยอัลตราซาวนด์ปกติและผู้ป่วยที่เป็นลบ AFP จำนวน 331 ราย ความไวและความจำเพาะของ cfDNA สำหรับการวินิจฉัย HCC เท่ากับ 100% และ 94% ตามลำดับ ดังนั้น cDNA สามารถตรวจพบ HCC ในบุคคลที่ติดเชื้อ HBsAg ที่ไม่มีอาการในการศึกษา Yeo48 พบว่ามี hypermethylation สูง (92.5%) ของโปรโมเตอร์ RASSF1A ในผู้ป่วย HCCนอกจากนี้ Xu และคณะได้สร้างแบบจำลองการวินิจฉัยเพื่อทำนาย HCC โดยใช้แผงของเครื่องหมายเมทิลเลชั่นเฉพาะที่มีความจำเพาะและความไว 90.5% และ 83.3% ตามลำดับแผงนี้ช่วยให้ผู้ป่วย HCC แตกต่างจากผู้ป่วยโรคตับอื่น ๆ ซึ่งดีกว่า AFPพวกเขายังพบว่าการควบคุมตามปกติที่ทดสอบในเชิงบวกอาจมีปัจจัยเสี่ยงสำหรับ HCC เช่นการติดเชื้อ HBV หรือมีประวัติการใช้แอลกอฮอล์25 เราตั้งสมมติฐานว่าปัจจัยที่มีความเสี่ยงสูงสำหรับ HCC อาจส่งเสริมการเกิดไฮเปอร์เมทิลเลชันของ cfDNA ซึ่งต่อมามีส่วนทำให้เกิดความก้าวหน้าของ HCC และด้วยเหตุนี้ cfDNA อาจมีบทบาทสำคัญในการคัดกรองกลุ่มที่มีความเสี่ยงสูงไคและคณะสรุปการกลายพันธุ์ของ ctDNA อย่างเต็มรูปแบบและเสนอกลยุทธ์ที่มีประสิทธิภาพสำหรับการประเมินภาระเนื้องอกในผู้ป่วย49 กลยุทธ์นี้สามารถระบุการเกิดเนื้องอกได้เป็นค่ามัธยฐาน 4.6 เดือนก่อนการเปลี่ยนแปลงภาพ และแสดงประสิทธิภาพการวินิจฉัยที่เหนือกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับตัวบ่งชี้ทางชีวภาพในซีรัม AFP, AFP-L3 และ PIVKA-IIค่าการวินิจฉัยของการทดสอบ cDNA ได้รับการแสดงให้เห็นเมื่อไม่มีการประเมินภาพ ดังนั้นการทดสอบ cDNA จึงมีประโยชน์ในการวินิจฉัย HCC ในระยะเริ่มต้นในกลุ่มที่มีความเสี่ยงสูงเมื่อเร็ว ๆ นี้ นักวิทยาศาสตร์ใช้เทคโนโลยี NGS เพื่อวิเคราะห์ตัวบ่งชี้ของการแปรผันทางพันธุกรรมหลายตัวแปร (รวมถึง 5-hydroxymethylcytosine, 5′-motif, fragmentation, nucleosome trace, HIFI) ในตัวอย่างทางคลินิก 3204 ตัวอย่างและ cfDNAโมเดล HIFI ที่ตรวจสอบอีกครั้ง 50 รุ่นพร้อมชุดฝึก การทดสอบ และชุดทดสอบอิสระสามชุดแสดงให้เห็นว่ามีการเลือกปฏิบัติที่เสถียรและเชื่อถือได้ระหว่างกลุ่มประชากร HCC และกลุ่มที่ไม่ใช่ HCC ด้วยความไว 95.79% และ 95.42% ในชุดทดสอบและชุดทดสอบเฉพาะ HCC ตามลำดับเพศคือ 95.00% และ 97.83% ตามลำดับค่าการวินิจฉัยของวิธี HIFI นั้นสูงกว่าของ AFP ในการแยกแยะ HCC จากโรคตับแข็งนอกจากนี้ ctDNA ยังใช้ในการรักษาทางศัลยกรรมอีกด้วยอัตสึชิและคณะกำหนดระดับซีรั่มของ ctDNA ในซีรัมก่อนผ่าตัดในผู้ป่วยที่มี HCC และพบว่าอัตราการกลับเป็นซ้ำและอัตราการแพร่กระจายนอกตับในกลุ่มที่เป็นบวก cDNA นั้นสูงกว่ากลุ่มที่เป็นลบของ cDNA และระดับ cDNA มีความสัมพันธ์กันอย่างมีนัยสำคัญด้วยความก้าวหน้าของเนื้องอก51 เนื่องจากเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่มีความไวสูง ctDNA สามารถทำนายความสามารถของ HCC ในการบุกรุกเรือได้วังและคณะดำเนินการจัดลำดับจีโนมทั้งหมดของผู้ป่วย 46 รายที่มี HCC และการวิเคราะห์หลายตัวแปรพบว่าค่าเกณฑ์ของความถี่อัลลีลของตัวแปร cDNA สำหรับการบุกรุกเข้าไปใน microvessels คือ 0.83% ความไว 89.7% และความจำเพาะ 80.0%ปัจจัยเสี่ยงอิสระสำหรับการบุกรุกของ microvascular ใน HCC ที่ตัดออกได้ ซึ่งบ่งชี้ว่า cDNA อาจช่วยแนะนำการรักษาที่เหมาะสมที่สุดโดยสรุป ctDNA มีส่วนเกี่ยวข้องอย่างเต็มที่ในการเกิดขึ้นและการพัฒนาของ HCC และสามารถนำมาใช้สำหรับการตรวจคัดกรองในระยะเริ่มต้น การประเมินการผ่าตัด และการติดตามโรคได้
CTCs เป็นเซลล์ร้ายที่ได้มาจากเนื้องอกปฐมภูมิหรือการแพร่กระจายที่แพร่กระจายไปยังกระแสเลือดเซลล์เนื้องอกจะหลั่งเมทริกซ์เมทัลโลโปรตีน (MMPs) ซึ่งทำลายเยื่อหุ้มชั้นใต้ดิน ทำให้เซลล์เนื้องอกสามารถเข้าสู่กระแสเลือดและหลอดเลือดน้ำเหลืองได้โดยตรงอย่างไรก็ตาม CTC ส่วนใหญ่จะถูกกำจัดอย่างรวดเร็วโดย anoikis การโจมตีของภูมิคุ้มกัน หรือความเครียดจากแรงเฉือน53 การเปลี่ยนแปลงของเยื่อบุผิว-มีเซนไคม์ (EMT) ช่วยให้สามารถแยก CTC ออกจากเนื้อเยื่อเนื้องอกปฐมภูมิ บุกรุกเส้นเลือดฝอย และได้รับการปรับปรุงอย่างมีนัยสำคัญการรอดชีวิต การแพร่กระจาย การรุกราน และการดื้อยาจากการศึกษาพบว่ามีความแตกต่างกันอย่างมากระหว่างเซลล์เนื้องอกต่างๆ ในเนื้องอกระยะแพร่กระจายปฐมภูมิดังนั้น การวิเคราะห์ CTC สามารถนำไปสู่ความเข้าใจที่ครอบคลุมเกี่ยวกับความแตกต่างของเซลล์เนื้องอก54
ตัวบ่งชี้ที่จำเพาะสำหรับ CTC ที่เกี่ยวข้องกับ HCC รวมถึง glypican-3 (GPC3), asialoglycoprotein receptor (ASGPR), โมเลกุลการยึดเกาะของเซลล์เยื่อบุผิว (EpCAM) และมาร์กเกอร์ที่เกี่ยวข้องกับสเต็มเซลล์ เช่น CD44, CD90, 55 และโมเลกุลการยึดเกาะระหว่างเซลล์ 1 (ICAM1)) .56 เครื่องหมาย GPC3 เป็นโปรตีนที่ยึดกับเยื่อหุ้มเซลล์ซึ่งใช้ในทางคลินิกสำหรับการวิเคราะห์ทางพยาธิวิทยาและการกำหนดลักษณะเฉพาะของ HCC57 การแสดงออกของ GPC3 พบได้บ่อยในเซลล์เนื้องอก HCC ที่มีความแตกต่างระดับกลางและต่ำ และส่งเสริมการย้ายถิ่นนอกตับนอกจากนี้ การมี GPC3+ CTCs ยังบ่งชี้ถึงการแพร่กระจายของ HCC58 ASGPR เป็นโปรตีนทรานส์เมมเบรนที่แสดงออกเฉพาะบนพื้นผิวของเซลล์ตับและแสดงออกอย่างมากใน HCC ที่มีความแตกต่างอย่างดีEpCAM เป็นหนึ่งในโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับเมมเบรนที่ใช้กันมากที่สุดในการดักจับ CTCEpCAM ได้รับการระบุว่าเป็นเครื่องหมายบนพื้นผิวของเซลล์ HCC ที่มีลักษณะเฉพาะของสเต็มเซลล์ ซึ่งสัมพันธ์กับลักษณะทางคลินิกต่างๆ ของ HCC เช่น การบุกรุกของหลอดเลือด การประเมินระดับ AFP และระยะลุกลามของมะเร็งตับที่โรงพยาบาลบาร์เซโลนา (BCLC)ฟีโนไทป์ 60 CTC EMT มีการแพร่กระจายอย่างมาก54 กระบวนการ EMT ใน CTC ส่งเสริมการแพร่กระจายของ HCCการแสดงออกของเครื่องหมาย EMT เช่น vimentin, twist, E-box zinc finger binding (ZEB) 1, ZEB2, หอยทาก, กระสุน และ E-cadherin ได้รับการศึกษาใน CTC ที่ได้รับจากตับจากผู้ป่วย HCC58 ระบบ CanPatrol™ ที่พัฒนาโดย Cheng [61] ได้จำแนก CTC ออกเป็นสามกลุ่มย่อยฟีโนไทป์ตามเครื่องหมายที่แสดงออกอย่างเด่นชัด: ฟีโนไทป์ของเยื่อบุผิว (EpCAM, CK8/18/19), ฟีโนไทป์มีเซนไคมอล (วิเมนติน, ขด) และฟีโนไทป์แบบผสมในผู้ป่วย 176 ราย CTC ทั้งหมดดีกว่า AFP ในการแยกความแตกต่างของ HCC จากโรคตับที่ไม่เป็นพิษเป็นภัยค่า AUC สำหรับ CTC ทั้งหมด, AFP และ CTC ทั้งหมดและ AFP รวมกันคือ 0.774 (95% CI, 0.704–0.834), 0.669 (95% CI, 0.587–0.750) และ 0.821 (95% CI, 0.756–0.886 ).) ตามลำดับการจำแนกประเภท CTC ตาม EMT สามารถทำนายการวินิจฉัย HCC การกลับเป็นซ้ำในระยะเริ่มต้น การแพร่กระจาย และเวลาโดยรวมที่สั้นลง
ในปัจจุบัน วิธีการตรวจหา CSC รวมถึงวิธีการทางกายภาพและวิธีทางชีวภาพวิธีการทางกายภาพ มักเรียกว่าการเสริมสมรรถนะตามคุณสมบัติทางชีวฟิสิกส์ ส่วนใหญ่ขึ้นอยู่กับคุณสมบัติทางกายภาพของ CSC เช่น ขนาด ความหนาแน่น ประจุ การเคลื่อนที่ และความสามารถในการเปลี่ยนรูปขึ้นอยู่กับคุณสมบัติทางกายภาพ มีวิธีการต่างๆ เช่น ระบบที่ใช้การกรอง ไดอิเล็กโตรโฟรีซิส เป็นต้น วิธีหลังหรือที่เรียกว่าการเสริมสมรรถนะตามอิมมูโนแอฟฟินิตี้นั้นส่วนใหญ่ยึดตามการจับกับแอนติเจนและแอนติบอดี เนื่องจากวิธีนี้ใช้แอนติบอดีต้านไบโอมาร์คเกอร์ที่จำเพาะต่อเนื้องอก เช่น EpCAM, ASGPR, ตัวรับปัจจัยการเจริญเติบโตของผิวหนังชั้นนอก 2 (HER2), แอนติเจนจำเพาะต่อมลูกหมาก (PSA), pancytokeratin ของมนุษย์ (P-CK) และ carbamoyl phosphate synthase 1 (CPS1)62 อีกประเภทหนึ่ง เรียกว่าวิธีการไม่เพิ่มคุณค่า ใช้โฟลว์ไซโตเมทรีเพื่อแยกความแตกต่างของ CTC จากเม็ดเลือดขาวตามอัตราส่วนและขนาดนิวเคลียร์ต่อไซโตพลาสซึมที่สูงขึ้นในปัจจุบัน การทดสอบเดียวที่ได้รับการอนุมัติจาก FDA สำหรับการตรวจจับ CTC คือระบบ Cell-Search™ ซึ่งใช้เครื่องหมายพื้นผิวเซลล์ EpCAM อย่างไรก็ตาม การตรวจหา CTC แบบรวมโดยใช้เครื่องหมายอาจเพิ่มอัตราการเป็นบวกได้54 ส่วนผสมของแอนติบอดีต่อ ASGPR และ CPS1 มีอัตราการตรวจหา CTC ที่ 91% ในผู้ป่วย HCC63 Zhang และคณะใช้ CTC-Chip ที่มีแอนติบอดีต่อต้าน ASGPR, P -CK และ CPS1 และผู้ป่วย HCC ที่แยกความแตกต่างจากผู้ที่มีโรคตับที่ไม่เป็นพิษเป็นภัยหรือมะเร็งที่ไม่ใช่ HCC ในอัตรา 100%.64 การศึกษาโดย Wang ตรวจพบ EpCAM+ CTCs ในผู้ป่วยร้อยละ 60 ของผู้ป่วย HCC 42 ราย และพบว่ามีความสัมพันธ์กันอย่างมีนัยสำคัญระหว่างผลบวกทั้งสอง อัตราและจำนวน CTC ที่มี TNM stage.65 Guo et al พบว่าคะแนน PCR ที่ได้จาก CTC เพิ่มขึ้นในผู้ป่วย 125/171 (73%) ที่มีระดับ AFP <20 ng/mL โดยมีความไว 72.5% และ ความจำเพาะ 95.0% เทียบกับ 57.0% และ 90.0% สำหรับ AFP ที่จุดตัด 20 ng/mL.66 การรวมกันของ AFP และ CTC อาจช่วยปรับปรุงการตรวจจับ HCC ได้45 เชื่อกันว่า CTC มีข้อได้เปรียบเหนือ AFP ในการตรวจคัดกรองกลุ่มในระยะแรกๆ ที่มีความเสี่ยงสูงสำหรับ HCC อย่างไรก็ตาม การตรวจหา CTC แบบรวมโดยใช้เครื่องหมายอาจเพิ่มอัตราการเป็นบวกได้54 ส่วนผสมของแอนติบอดีต่อ ASGPR และ CPS1 มีอัตราการตรวจหา CTC ที่ 91% ในผู้ป่วย HCC63 Zhang และคณะใช้ CTC-Chip ที่มีแอนติบอดีต่อต้าน ASGPR, P -CK และ CPS1 และผู้ป่วย HCC ที่แยกความแตกต่างจากผู้ที่มีโรคตับที่ไม่เป็นพิษเป็นภัยหรือมะเร็งที่ไม่ใช่ HCC ในอัตรา 100%.64 การศึกษาโดย Wang ตรวจพบ EpCAM+ CTCs ในผู้ป่วยร้อยละ 60 ของผู้ป่วย HCC 42 ราย และพบว่ามีความสัมพันธ์กันอย่างมีนัยสำคัญระหว่างผลบวกทั้งสอง อัตราและจำนวน CTC ที่มี TNM stage.65 Guo et al พบว่าคะแนน PCR ที่ได้จาก CTC เพิ่มขึ้นในผู้ป่วย 125/171 (73%) ที่มีระดับ AFP <20 ng/mL โดยมีความไว 72.5% และ ความจำเพาะ 95.0% เทียบกับ 57.0% และ 90.0% สำหรับ AFP ที่จุดตัด 20 ng/mL.66 การรวมกันของ AFP และ CTC อาจช่วยปรับปรุงการตรวจจับ HCC ได้45 เชื่อกันว่า CTC มีข้อได้เปรียบเหนือ AFP ในการตรวจคัดกรองกลุ่มในระยะแรกๆ ที่มีความเสี่ยงสูงต่อ HCCอย่างไรก็ตาม การตรวจหา CTC แบบรวมโดยใช้เครื่องหมายอาจเพิ่มเปอร์เซ็นต์ของผลลัพธ์ที่เป็นบวก54 ส่วนผสมของแอนติบอดีต้าน ASGPR และ CPS1 มีอัตราการตรวจหา CTC ที่ 91% ในผู้ป่วยที่มี HCC.63 Zhang และคณะใช้ CTC-Chip ที่มีแอนติบอดีต่อต้าน ASGPR, P-CK และ CPS1 และยังแยกแยะผู้ป่วยที่มี HCC จากผู้ที่เป็นโรคตับที่ไม่เป็นพิษเป็นภัยหรือไม่ใช่ HCC ในอัตรา 100%частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге กรูปป. ความถี่และจำนวนของ CTC ที่มี TNM stage.65 Guo et al พบว่า PCR ที่ได้จาก CTCs เพิ่มขึ้นในผู้ป่วย 125/171 (73%) ที่มีระดับ AFP <20 ng/mL โดยมีความไว 72.5% และความจำเพาะของ 95.0% เทียบกับ 57.0% และ 90.0% สำหรับ AFP ที่ระดับ cut-off 20 ng/mL.66 การรวมกันของ AFP และ CTC อาจช่วยปรับปรุงการตรวจหา HCC.45 CTCs ถือว่ามีข้อได้เปรียบเหนือ AFP ในการตรวจคัดกรองเบื้องต้น กลุ่มที่มีความเสี่ยงสูงต่อ HCCอย่างไรก็ตาม การตรวจหา CTC แบบรวมโดยใช้เครื่องหมายอาจเพิ่มเปอร์เซ็นต์ของผลลัพธ์ที่เป็นบวก54 ของผสมของแอนติบอดีต้าน ASGPR และ CPS1 มีอัตราการตรวจหา CTC 91% ในผู้ป่วยที่มี HCC63 จางและคณะใช้ชิป CTC ที่มีแอนติบอดีต่อต้าน ASGPR, P-CK และ CPS1 และแยกผู้ป่วยที่มี HCC จากโรคตับที่ไม่เป็นพิษเป็นภัยและไม่ใช่ HCC 100%การศึกษาของ 64 Wang ระบุ 60% ของ EpCAM+ CTCs ในผู้ป่วย 42 HCC และพบว่ามีความสัมพันธ์กันอย่างมีนัยสำคัญระหว่างอุบัติการณ์และจำนวน CTC ในระยะ TNM 65 Guo 等人发现，在AFP 水平<20 ng/mL 的125/171 (73%) 名患者中，CTC 衍生的PCR 评分升高，敏感性为72.5%，特异性为95.0%，而AFP 在截止值为20 ng/mL 时的特异性为57.0% 和90.0%。 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ， ctc 衍生 pcr 评分 ， 敏感性 为 为 72.5%， 为 95.0%， AFP 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值为20ng/mL 时的特异性为57.0% 和90.0%。65 กัวและคณะобнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг/มล. พบว่าในผู้ป่วย 125/171 (73%) ที่มีระดับ AFP <20 ng/mL ค่า PCR ที่ได้จาก CTC เพิ่มขึ้นด้วยความไว 72.5% และความจำเพาะ 95.0% ในขณะที่ AFP อยู่ที่ความจำเพาะเจาะจง คือ 20 ng/mLมล. คือ 57.0% และ 90.0%66 การรวมกันของ ORP และ CTC ช่วยปรับปรุงการตรวจจับ HCC45 CTCs ถือว่าเหนือกว่า AFP ในการตรวจคัดกรองเบื้องต้นของประชากร HCC ที่มีความเสี่ยงสูงดังนั้น สำหรับกลุ่ม HCC ที่เป็นบวกและมีความเสี่ยงสูง การทดสอบ CTC ควรใช้ร่วมกับการตรวจหาอัลตราซาวนด์และ AFP เป็นประจำอย่างไรก็ตาม CTC ถือเป็นตัวทำนายที่สำคัญของการแพร่กระจายของเนื้องอกและการกลับเป็นซ้ำ และการตรวจหา CTC นั้นไม่แนะนำให้ใช้เป็นเครื่องมือวินิจฉัย62 ดังนั้น CTC อาจทำหน้าที่เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่คาดการณ์ได้ดีกว่าเครื่องหมายอื่นที่ใช้อยู่ในปัจจุบัน Zhou et al พบว่าผู้ป่วยที่มี EpCAM+ CTCs และ regulatory T cells จำนวนมากมีความเสี่ยงที่จะเกิดการกลับเป็นซ้ำของ HCC มากกว่าผู้ที่มี CTC ต่ำ โดยมีอัตราส่วนการกลับเป็นซ้ำ 66.7% เทียบกับ 10.3% (P < 0.001).67 Zhong et al.68 รายงานการศึกษาที่คล้ายคลึงกัน นอกจากนี้ Qi พบว่าผู้ป่วย 101 คนจาก 112 คน (90.81%) ที่มี HCC รวมถึงผู้ที่เป็นโรคในระยะเริ่มแรกมีผลบวกต่อ CTC และตรวจพบก้อน HCC ขนาดเล็กมากหลังจาก 3 ถึง 5 เดือนของการติดตามผล Zhou et al พบว่าผู้ป่วยที่มี EpCAM+ CTCs และ regulatory T cells จำนวนมากมีความเสี่ยงที่จะเกิดการกลับเป็นซ้ำของ HCC มากกว่าผู้ที่มี CTC ต่ำ โดยมีอัตราส่วนการกลับเป็นซ้ำ 66.7% เทียบกับ 10.3% (P < 0.001).67 A การศึกษาที่คล้ายกันนี้รายงานโดย Zhong et al.68 นอกจากนี้ Qi พบว่าผู้ป่วย 101 รายจาก 112 ราย (90.81%) ที่มี HCC รวมถึงผู้ที่เป็นโรคในระยะเริ่มแรกมีผลบวกต่อ CTC และตรวจพบก้อน HCC ขนาดเล็กมากหลังจาก 3 ถึง ติดตามผลได้ 5 เดือน Чжоу и др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou et al พบว่าผู้ป่วยที่มี EpCAM+ CTCs และ regulatory T cells ที่สูงมีความเสี่ยงที่จะเกิดการกลับเป็นซ้ำของ HCC มากกว่าผู้ที่มี CTC ต่ำ โดยมีอัตราการกลับเป็นซ้ำ 66.7% เทียบกับ 10.3% (P<0.001 )67การศึกษาที่คล้ายกันนี้ดำเนินการโดย Zhong et al68. นอกจากนี้ Qi พบว่าผู้ป่วย 101 รายจาก 112 ราย (90.81%) ที่มี HCC รวมทั้งผู้ที่เป็นโรคในระยะเริ่มต้น มี CTCs และตรวจพบก้อนเนื้องอก HCC ขนาดเล็กมากหลังจากติดตาม 3 ถึง 5 เดือน Zhou 等人发现，与CTC 数量较少的患者相比，EpCAM+ CTC 和调节性T 细胞数量升高的患者发生HCC 复发的风险更高，复发率分别为66.7% 和10.3% (P < 0.001)。 Zhou 等 人 发现 与 与 ctc 数量 少 的 患者 相比 ， epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 风险 更 ， 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10.3% p <0.001)。。。。。。。。。。。。。。 Чжоу и др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). โจวและคณะพบว่าผู้ป่วยที่มี EpCAM+ CTCs และ regulatory T cells มีความเสี่ยงที่จะเกิดการกลับเป็นซ้ำของ HCC มากขึ้น เมื่อเทียบกับผู้ป่วยที่มี CTC น้อยกว่า โดยมีอัตราการกลับเป็นซ้ำ 66.7% และ 10.3% ตามลำดับ (P < 0.001)Zhong et al. รายงานการศึกษาที่คล้ายกัน68 นอกจากนี้ Qi พบว่าผู้ป่วย HCC 101 รายจาก 112 ราย (90.81%) รวมทั้งผู้ป่วยที่เป็นโรคในระยะเริ่มต้นมีผล CTC ที่เป็นบวกและพบก้อน HCC ขนาดเล็กมากหลังการเข้าชม 3 ครั้งสังเกตได้นานถึง 5 เดือนพวกเขายังพบ CTCs ในผู้ป่วย 12 รายที่ติดเชื้อ HBV เรื้อรัง และพบเนื้องอก HCC ขนาดเล็กภายใน 5 เดือนในผู้ป่วย 2 CTC-positive69 ดังนั้น CTC สามารถใช้ทำนาย HCC ได้ 70 แต่สามารถใช้เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่คาดการณ์ได้เป็นประจำ
เช่นเดียวกับ cfDNA cfRNA จะถูกปล่อยเข้าสู่กระแสเลือดผ่านระบบต่างๆโมเลกุลเหล่านี้ในเลือดส่วนปลายเป็นตัวแทนของเนื้อเยื่อต้นกำเนิดมะเร็งเมื่อเทียบกับเครื่องหมายที่ตรวจพบโดยวิธีการที่ไม่รุกราน cfRNAs จะถูกควบคุมแบบไดนามิกมากกว่า จำเพาะต่อเนื้อเยื่อ และมีมากในสภาพแวดล้อมภายนอกเซลล์มีการรายงานความสำคัญและค่าการวินิจฉัยของ 71 miRNAs (miRNAs) ใน HCC ในการศึกษาจำนวนมากmiRNAs เป็น RNA ที่ไม่มีการเข้ารหัสภายใน (ncRNAs) ที่ควบคุมกิจกรรมทางอณูชีววิทยาต่างๆ โดยการยับยั้งการแปล RNA ของผู้ส่งสารเป้าหมาย (mRNAs)miRNAs ตั้งอยู่ในร่างกาย apoptotic ที่ห่อหุ้มใน exosomes แต่ยังสามารถจับกับโปรตีนในซีรัมและไขมันในเลือดได้อย่างเสถียรและสามารถใช้เพื่อประเมิน HCC ได้microRNAs เกี่ยวข้องกับการสร้างใหม่ของตับ เมแทบอลิซึมของไขมัน การตายของเซลล์ การอักเสบ และการพัฒนาของ HCC72 Oncogenic miRNAs เช่น miR-21, miR-155 และ miR-221 เป็นที่รู้จักกันดีใน HCCโดยเฉพาะอย่างยิ่ง miR-21 มีบทบาทสำคัญในการสังเคราะห์คอลลาเจนในเมทริกซ์นอกเซลล์และการเกิดพังผืด และส่งเสริมการสร้างมะเร็งตับด้วยการกระตุ้นเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือด72,73 เนื้องอกต้าน miRNAs ใน HCC รวมถึง miRNA-122, miRNA-29, ตระกูล Let-7 และตระกูล miRNA-15ตระกูล Let-7 ประกอบด้วย miRNA ที่ต้านเนื้องอกจำนวนมากที่กำหนดเป้าหมายไปยังตระกูล RASแฟมิลี miR-15 รวมถึง miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 และ miR-497 ซึ่งมีลำดับเสริมสำหรับ mRNA บางตัวนอกจากนี้ RNA ที่ไม่มีการเข้ารหัสแบบยาว (lncRNAs) และ RNA แบบวงกลม (cirRNAs) แบบยาวก็มีความสำคัญเช่นกันสำหรับการตรวจคัดกรอง HCC ในระยะเริ่มต้นlncRNAs เป็นตัวแทนของ ncRNAs ที่กว้างที่สุด ซึ่งรวมถึง ncRNA ที่คล้ายกับ mRNA และเกี่ยวข้องกับการเกิดโรคในมนุษย์หลายชนิดLncRNAs มีบทบาทกำกับดูแลในสภาพแวดล้อมจุลภาคของตับและโรคตับเรื้อรัง74 CircRNAs เป็นคลาสของ ncRNAs ที่มีหน้าที่หลายอย่างในการควบคุมการแสดงออกของยีนเมื่อเร็ว ๆ นี้ circRNAs ได้รับการพิจารณาให้เป็นเครื่องมือวินิจฉัยสำหรับ HCC
RNA ที่ปราศจากการหมุนเวียนมีเสถียรภาพที่โดดเด่น รวมถึงการต้านทานต่ออุณหภูมิ pH และ RNase ซึ่งทำให้การแยก fnRNA ออกจากเลือดส่วนปลายนั้นน่าเบื่อน้อยลงโดยใช้วิธีการทำให้บริสุทธิ์ RNA มาตรฐานวิธีการที่ใช้บ่อยที่สุด ได้แก่ NGS, microarray และ RT-qPCRNGS ช่วยให้สามารถวัด microRNAs ได้ทั่วทั้งจีโนมอย่างไรก็ตาม วิธีนี้มีราคาแพงและการวิเคราะห์ไม่ได้มาตรฐานในทางตรงกันข้าม RT-qPCR มีราคาไม่แพง ขยายกรดนิวคลีอิกอย่างรวดเร็ว และมีข้อดีหลายประการ เช่น ความไวที่สูงขึ้น ความแม่นยำที่สูงขึ้น ช่วงไดนามิกที่กว้างขึ้น และต้องการตัวอย่างน้อยลงไมโครอาร์เรย์เป็นอีกวิธีหนึ่งที่ใช้สำหรับการตรวจจับ miRNA โดยอิงจากการผสมข้ามพันธุ์ที่ละเอียดอ่อนและจำเพาะของ miRNA เป้าหมายด้วยโพรบ DNA เสริม 75 แต่การวิเคราะห์ข้อมูลไมโครเรย์นั้นใช้เวลานาน
การไหลเวียนของ miR-122 และ Let-7 ได้รับรายงานว่าอาจเป็นประโยชน์ในการวินิจฉัย HCC ระยะเริ่มต้นในกลุ่มที่มีความเสี่ยงสูง เครื่องหมายในผู้ป่วยที่มีก้อนมะเร็งก่อนกำหนดที่เกี่ยวข้องกับ HBV และ HCC ระยะเริ่มต้น76 ไคและคณะพบว่าสมาชิกในครอบครัว Let-7 (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 และ miR-199a/b) มีความเสี่ยงที่จะเป็นโรคเรื้อรัง HCC ในผู้ป่วยโรคตับอักเสบตระกูล Let-7 สามารถทำหน้าที่เป็น biomarker ตัวแทนที่มีประสิทธิภาพในการทำนายการพัฒนาของ HCC ในกลุ่มที่มีความเสี่ยงสูงที่เกี่ยวข้องกับโรคตับอักเสบซีเรื้อรัง C 77 miR-122 มีความแม่นยำในการวินิจฉัยสูงในการตรวจหา HCC ระยะแรกในผู้ป่วยที่เป็นโรคตับแข็ง78 เซรั่มที่หมุนเวียน MiR-107 ยังได้รับการประเมินในช่วงเริ่มต้นของ HCC ที่ 79 และแสดงให้เห็นศักยภาพที่ดีในประชากรที่มีความเสี่ยงสูงZhou et al รายงานว่ากลุ่มของ miRNAs (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a และ miR-801) สามารถแยกความแตกต่างของ HCC จากโรคตับอักเสบบีเรื้อรัง (CHB) และโรคตับแข็ง ความไวคือ 79.1% และ 75% และความจำเพาะ 76.4% และ 91.1% ตามลำดับ80 ใน HCC ที่เกี่ยวข้องกับ HBV เราพบว่าระดับ miR150 ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับในผู้ป่วย HBV เรื้อรังที่ไม่มี HCC (ความไว 79.1% ความจำเพาะ 76.5%)-224 สูงขึ้นใน HCC เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมที่มีสุขภาพดี และการวิเคราะห์กลุ่มย่อยพบว่ามีระดับที่สูงขึ้นในผู้ป่วยที่มี HCC ที่เกี่ยวข้องกับ HBVโรคตับแข็งที่เกี่ยวข้องกับตับอักเสบบีและผู้ป่วย HCC ระบุตัวจำแนก siRNA ที่มี siRNAs ที่แสดงความแตกต่างเจ็ดชนิดซึ่งสามารถตรวจจับ HCC ในการควบคุมที่แตกต่างกันช่วง AUC ที่การตรวจคัดกรองเบื้องต้นนั้นดีกว่าอาสาสมัครของ AFPพวกเขาพบว่า miRNA สี่ตัว (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p และ miR-365a-3p) สามารถแยกแยะผู้ป่วยที่มี HCC ออกจากผู้ป่วยที่ไม่มี HCCmiRNAs ที่แสดงออกมากเกินไปห้าตัว (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p และ miR-148a-3p) ถือเป็นการติดเชื้อ HBV ที่อาจเกิดขึ้นใน HCC, โรคตับแข็ง และ CHB biomarkers โดยเฉพาะอย่างยิ่ง miR-34a-5p อาจเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพสำหรับโรคตับแข็ง 85 และอาจเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพสำหรับการตรวจคัดกรอง HCC ในระยะเริ่มต้นในประชากรที่มีความเสี่ยงสูงlncRNA ที่ศึกษามากที่สุดใน HCC ถูกกระตุ้นอย่างมากในมะเร็งตับ (HULC)การศึกษาอื่น ๆ แสดงให้เห็นว่า HULC ที่หมุนเวียนในผู้ป่วย HCC สามารถใช้เป็นเครื่องบ่งชี้การวินิจฉัยได้ เนื่องจาก lncRNA นี้ได้รับการควบคุมอย่างสูงในผู้ป่วย HCC เมื่อเทียบกับบุคคลที่มีสุขภาพดี71,86 ในบรรดา lnRNAs อื่นๆ LINC00152 ถือเป็น lncRNA สำหรับการวินิจฉัยที่ดีที่สุดเนื่องจากมี AUC ความไวและความจำเพาะสูง86 ในการศึกษาหนึ่ง การแสดงออกของเลือดส่วนปลายของ LINC00152 ค่อยๆ เพิ่มขึ้นจากกลุ่มควบคุมปกติที่มีสุขภาพดีไปจนถึงผู้ป่วยที่เป็นโรค CHB และโรคตับแข็ง และในที่สุดก็มีระดับสูงสุดใน HCCการศึกษาการแสดงออกของ circSMARCA5 ในพลาสมาของผู้ป่วยที่มี HCC ได้แสดงให้เห็นการลดลงของการแสดงออกใน HCC ตั้งแต่ตับอักเสบไปจนถึงตับแข็งและรอยโรคในมะเร็งระยะก่อนมะเร็ง87 การวิเคราะห์กราฟ ROC ยืนยันศักยภาพของ circRNA เหล่านี้ในการแยกแยะผู้ป่วยโรคตับอักเสบหรือโรคตับแข็งในตับจากผู้ที่มี HCC โดยเฉพาะอย่างยิ่งผู้ที่มีระดับ AFP ต่ำกว่า 200 ng/mLนอกจากนี้ Zhu ได้วิเคราะห์ RNA แบบไซคลิก 13,617 ตัวในตัวอย่างพลาสมาจากผู้ป่วย HCC ที่เกี่ยวข้องกับ HBV และยืนยันว่า RNA วัฏจักร 6 ตัวแสดงออกแตกต่างกันในตับแข็งที่เกี่ยวข้องกับ HCC และ HBV ซึ่งบ่งชี้ว่า cRNA อาจเป็นประโยชน์เครื่องหมายสำหรับการตรวจคัดกรองกลุ่มเสี่ยงในระยะเริ่มต้น เช่น กลุ่มโรคตับ ผู้ป่วยเส้นโลหิตตีบ88
Exosomes เป็นถุงเมมเบรนที่มีเส้นผ่านศูนย์กลาง 40–160 นาโนเมตรถุงภายในเซลล์จำนวนมากหลอมรวมกับเยื่อหุ้มเซลล์และถูกปล่อยออกสู่เมทริกซ์นอกเซลล์ประกอบด้วยส่วนประกอบที่ออกฤทธิ์หลายอย่าง รวมทั้งไขมัน โปรตีน RNA และ DNA และมีบทบาทสำคัญในการสื่อสารระหว่างเซลล์ ทั้งเซลล์ HCC และเซลล์ที่ไม่ใช่ HCC89,90 Exosomes ควบคุมการลุกลามของ HCC โดยกระตุ้นเซลล์ตับและเซลล์สเตลเลต เซลล์ภูมิคุ้มกัน เซลล์ตับปกติ และเซลล์ HCC91 ในสภาพแวดล้อมจุลภาคของเนื้องอก เซลล์เนื้องอกผลิตเอ็กโซโซมจำนวนมากที่ถูกลำเลียงจากเซลล์มะเร็งไปยังเซลล์ที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะ ซึ่งจะเกี่ยวข้องกับการสร้างเนื้องอก การเสื่อมสภาพ และการส่งสัญญาณของเซลล์92 การศึกษาแสดงให้เห็นว่า exosomes สามารถถ่ายโอน oncogenes ไปยังเซลล์ปกติในระหว่างกระบวนการทางพยาธิวิทยา ซึ่งอาจเป็นหนึ่งในกลไกของการบุกรุกของเนื้องอกและการแพร่กระจาย93 บทบาทของเอ็กโซโซมในการลุกลามของมะเร็งอาจเป็นแบบไดนามิกและจำเพาะสำหรับชนิดของมะเร็ง 89 เอ็กโซโซมอาจถูกทำให้อยู่ภายในโดยเซลล์ที่อยู่ติดกันหรือเซลล์ที่อยู่ห่างไกลเพื่อควบคุมยีนเป้าหมายหลายตัวในเซลล์ผู้รับที่อาจเกี่ยวข้องกับไอออนการสื่อสารระหว่างเซลล์และปฏิสัมพันธ์ระหว่างสภาพแวดล้อมระดับจุลภาคของเซลล์ พวกมันอาจ ไกล่เกลี่ยการส่งสัญญาณและการเผาผลาญของเซลล์94 ลักษณะและการเปลี่ยนแปลงแบบไดนามิกของโมเลกุลขนส่ง exosome สะท้อนถึงลักษณะเฉพาะและการเปลี่ยนแปลงแบบไดนามิกของเซลล์เนื้องอกในพ่อแม่ 95 ซึ่งเป็นพื้นฐานสำหรับการใช้ exosomes ในการวินิจฉัยและการพยากรณ์โรคมะเร็งเช่นเดียวกับการคาดการณ์การตอบสนองของแต่ละบุคคลต่อการรักษาด้วยยาต้านมะเร็ง ..96
วิธีการทางห้องปฏิบัติการแบบดั้งเดิมสำหรับการแยกและวิเคราะห์เอ็กโซโซมมีความซับซ้อน หลายขั้นตอน และใช้เวลานาน รวมถึงการปั่นเหวี่ยงด้วยความเข้มข้นสูง, การกรอง, โครมาโตกราฟีการแยกขนาด, การทำให้บริสุทธิ์ด้วยภูมิคุ้มกัน, Western blotting, การทดสอบอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ (ELISA), PCR และการวิเคราะห์การไหลระบบย่อขนาดและแพลตฟอร์มแล็บบนชิปที่ใช้ไมโคร/นาโนเทคโนโลยีได้รับการพัฒนาอย่างกว้างขวางสำหรับการแยกเอ็กโซโซมในแหล่งกำเนิดที่รวดเร็วและสะดวกสบายการวิเคราะห์การติดตามอนุภาคระดับนาโน (NTA) เป็นวิธีที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการจำแนกลักษณะขนาดและความเข้มข้นของเอ็กโซโซม รวมถึงวิธีการต่างๆ เช่น อนุภาคนาโนแม่เหล็กและโพลีไฮดรอกซีอัลคาโนเอตวิธีการไมโครฟลูอิดิกและเคมีไฟฟ้ายังสามารถตรวจจับเอ็กโซโซมได้อย่างรวดเร็วด้วยผลผลิตสูง
โปรตีน Exosomal เป็นตัวบ่งชี้ที่สำคัญสำหรับการวินิจฉัย HCCในการศึกษา Arbelaiz ระดับของโปรตีนที่จับกับ RasGAP SH3 98 (G3BP) และตัวรับโพลีเมอร์อิมมูโนโกลบูลิน (PIGR) เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญใน exosomes ที่ได้มาจาก HCC และประสิทธิภาพโดยรวมของโปรตีนทั้งสองนั้นเหนือกว่าของ AFPภาวะเหล็กเกินเป็นปัจจัยสำคัญที่เอื้อต่อการพัฒนา HCCTseng รายงานว่า hepcidin อาจมีบทบาทสำคัญในการต่อต้าน HCC99 Exosomes ที่ได้มาจากซีรั่มของผู้ป่วย HCC มีจำนวนสำเนาของ hepcidin mRNA ที่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญมากกว่าคู่ที่มีสุขภาพดี ซึ่งบ่งชี้ว่า hepcidin อาจเป็น biomarker การวินิจฉัยใหม่สำหรับ HCCโปรตีน 14-3-3ζ ในเอ็กโซโซมที่ผลิตขึ้นโดย 100 HCC สามารถลดการกระตุ้น การเพิ่มจำนวน และการสร้างความแตกต่างของทีเซลล์ และสามารถเหนี่ยวนำการเปลี่ยนแปลงของทีเซลล์ไปเป็นการควบคุมทีเซลล์ ส่งผลให้เกิดการพร่องของทีเซลล์101 สิ่งนี้ได้รับการสนับสนุนโดยการศึกษาหลายชิ้นที่ตรวจสอบการหลีกเลี่ยงเนื้องอกจากการเฝ้าระวังภูมิคุ้มกัน 102 ซึ่งอาจมีส่วนทำให้เกิดเนื้องอกของ HCC
นอกจากการมี ecRNA ในพลาสมาหรือซีรัมแล้ว exosomes ที่เสริมด้วย RNA ยังสามารถนำมาใช้สำหรับการแสดงละครแบบเรียลไทม์ที่ไม่รุกรานในการตรวจคัดกรองเนื้องอกในระยะเริ่มต้น และเพื่อกำหนดวิวัฒนาการของเนื้องอกและการตอบสนองต่อการรักษาระดับของ exosomal miRNA-21 ในเลือดซีรัมในกลุ่ม HCC นั้นสูงกว่าในกลุ่ม CHB 2.21 เท่า และในกลุ่ม HCC นั้นสูงกว่าในประชากรที่มีสุขภาพดี 5.57 เท่าในการศึกษาของ Wang exosomes เพิ่ม HCC อย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับผู้ป่วยโรคตับแข็งที่มีค่า AUC 0.83 (95% CI 0.74–0.93) และ 0.94 (95% CI 0.88–1.00)104 ข้อมูลที่ได้รับชี้ให้เห็นถึงการมีส่วนร่วมของโมเลกุลของสินค้าภายนอกที่จำเพาะในการควบคุมการเกิดมะเร็งและความก้าวหน้าของ HCC105 การแสดงออกของซีรัมของ miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 และ miR-26a มีความสอดคล้องกันและการแพร่กระจาย และระดับ miR21 ในผู้ป่วย HCC สูงกว่ากลุ่มควบคุมที่มีสุขภาพดีและในผู้ป่วย CHB มาก 102 LncRNA มีค่าการวินิจฉัยที่เป็นไปได้ใน HCCการศึกษาพบว่า exosomes ที่ได้จากซีรั่มของผู้ป่วย HCC มีระดับ LINC00161, LINC000635 และ lncRNA ที่สูงกว่าอย่างมีนัยสำคัญโดยการกระตุ้นด้วยการเปลี่ยนปัจจัยการเจริญเติบโต-β มากกว่าในผู้ป่วยที่ไม่มี HCC และ lncRNA เหล่านี้มีความสัมพันธ์อย่างมากกับระยะ TNM และปริมาตรของเนื้องอก110 Conigliaro และคณะพบว่าเอ็กโซโซม CD90+ แสดงระดับ lncRNAH19 สูง ซึ่งเพิ่มการปลดปล่อยปัจจัยการเจริญเติบโตของบุผนังหลอดเลือด (VEGF) และการผลิตรีเซพเตอร์ VEGF-R1 อย่างมีนัยสำคัญ โดยวิธีนี้กระตุ้นการสร้างเส้นเลือดใหม่93 CircRNAs เป็น ncRNAs ภายนอกอีกประเภทหนึ่ง ซึ่งแสดงออกที่ระดับที่ต่ำกว่าแต่คงที่ทั่วทั้งสปีชีส์ circRNA ยังแสดงความจำเพาะสำหรับชนิดเซลล์ ชนิดของเนื้อเยื่อ ระยะการพัฒนา และกิจกรรมควบคุม111 circRNAs เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพในการวินิจฉัยสำหรับมะเร็งระยะแรกและระยะแพร่กระจายน้อยที่สุด112 การทดลองทางคลินิกล่าสุดแสดงให้เห็นว่าความจำเพาะของ miRNA แต่ละตัวในการทำนาย HCC นั้นไม่เหมาะดังนั้น การตรวจหาที่ซับซ้อนโดยใช้การทดสอบหลายชุด (เช่น miR-122 และ miR-48a ร่วมกับ AFP) อาจปรับปรุงการระบุ HCC ในระยะเริ่มต้นและการแยกความแตกต่างของ HCC จากโรคตับแข็ง100
ผู้ป่วยที่มี CHB และตับแข็งเป็นกลุ่มที่มีความเสี่ยงสูงในการพัฒนา HCCสำหรับกลุ่มที่มีความเสี่ยงสูง เมื่อมีการตอบสนองต่อไวรัสอย่างยั่งยืนแล้ว ควรมีการพัฒนากลยุทธ์การเฝ้าระวังที่คุ้มค่าใช้จ่ายตามความเสี่ยงของ HCC และการตรวจคัดกรองในระยะเริ่มต้นเป็นกุญแจสำคัญในการปรับปรุงการวินิจฉัยและการรักษา HCC ด้วยอัตราส่วนความคุ้มค่าสูง2 ..วิธีการตรวจคัดกรองมะเร็งในระยะเริ่มต้นมีข้อจำกัดหลายประการ: วิธีการตรวจคัดกรองมะเร็งในระยะเริ่มต้นยังไม่ได้รับการพัฒนาสำหรับมะเร็งส่วนใหญ่ และมักจะมีความสม่ำเสมอต่ำเมื่อเทียบกับวิธีการตรวจคัดกรองเบื้องต้นแบบเดิม เทคโนโลยีการตรวจชิ้นเนื้อของเหลวมีข้อดีที่ชัดเจน ได้แก่ ความง่ายในการสุ่มตัวอย่าง การตรวจจับ Panrac ความสามารถในการทำซ้ำตัวอย่างที่ดี และการตอบสนองต่อความแตกต่างของเนื้องอกอย่างมีประสิทธิภาพเมื่อพิจารณาถึงความคุ้มค่าของวิธีการที่เกี่ยวข้องกับการตรวจชิ้นเนื้อของเหลว การใช้วิธีการเหล่านี้ในการตรวจคัดกรอง HCC ยังไม่ได้รับการทดสอบเป็นประจำแม้จะมีความก้าวหน้าในการตรวจจับที่แม่นยำในระดับโมเลกุล การตรวจชิ้นเนื้อของเหลวก็มีค่าใช้จ่ายสูงในการตรวจหา HCC ในผู้ป่วยเป้าหมาย ซึ่งจำกัดการใช้อย่างแพร่หลายเมื่อเทียบกับขั้นตอนการถ่ายภาพเฉพาะ เช่น อัลตราซาวนด์และการถ่ายภาพด้วยคลื่นสนามแม่เหล็ก113,114 อย่างไรก็ตาม การศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่าการตรวจชิ้นเนื้อของเหลวมีประโยชน์อย่างมากในแง่ของอายุขัยที่ปรับคุณภาพ (QALYs)115 ประโยชน์ของการตรวจชิ้นเนื้อของเหลวในมะเร็งกระเพาะอาหารและช่องจมูกในระยะเริ่มต้นยังแสดงให้เห็นอีกด้วย116,117 มุมมองปัจจุบันคือการตรวจชิ้นเนื้อของเหลวสามารถเสริม biomarkers ในซีรัมและการตรวจคัดกรองด้วยรังสีในการตรวจหาและวินิจฉัยเนื้องอก117 118
ตามเอกสารปัจจุบัน เทคโนโลยีการตรวจชิ้นเนื้อของเหลวได้แสดงความไวและความจำเพาะที่สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในการตรวจคัดกรองกลุ่มที่มีความเสี่ยงสูงสำหรับมะเร็งตับในระยะเริ่มต้นการตรวจชิ้นเนื้อของเหลวสามารถแยกแยะ HCC ออกจากบุคคลที่มีความเสี่ยงสูงได้โดยไม่ต้องใช้ HCC โดยไม่คำนึงถึงประเภทของการตรวจชิ้นเนื้อ ซึ่งชี้ให้เห็นถึงความสำคัญของการตรวจคัดกรองตั้งแต่เนิ่นๆ เนื่องจากความแตกต่างระหว่างบุคคลที่มีความเสี่ยงสูงและมีสุขภาพดีนั้นชัดเจนctDNA มีครึ่งชีวิตสั้นและสามารถใช้เพื่อตรวจหา HCC ได้ ดังนั้นการเปลี่ยนแปลงใดๆ ใน cDNA ที่ได้รับจากเนื้องอกสามารถให้หลักฐานที่เป็นรูปธรรมแบบเรียลไทม์ของความก้าวหน้าของเนื้องอก โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับเนื้องอกขนาดเล็กctDNA ในระดับสูงบ่งชี้ถึงการพัฒนาและการแพร่กระจายของมะเร็ง และเป็นตัวบ่งชี้เบื้องต้นของการลุกลามและการกลับเป็นซ้ำนอกจากนี้ จากผลของ ctDNA ผู้ป่วยสามารถรับการรักษาและติดตามผลเป็นรายบุคคลได้119 ตำแหน่งที่มีเมทิลเลชั่นเฉพาะอาจเป็นตัวบ่งชี้ที่ดีกว่า AFP สำหรับการระบุ HCC และก้อนเนื้อตับแข็งในระยะเริ่มต้นในกรณีของ HCC ที่ผ่าตัดได้ ระดับสูงของ cDNA บ่งบอกถึงการบุกรุกของ microvascular และการกลับเป็นซ้ำและการแพร่กระจายหลังการผ่าตัดการเปลี่ยนแปลงจำนวนสำเนามีความเกี่ยวข้องกับการอยู่รอดของผู้ป่วย HCCสามารถสันนิษฐานได้ว่าการประเมิน cDNA อาจเกี่ยวข้องกับการรักษา HCC โดยรวม และ cDNA สามารถทำหน้าที่เป็นตัวบ่งชี้ที่มีประสิทธิผลของการปรับการรักษาเครื่องหมายที่อิงจากการกลายพันธุ์ทางพันธุกรรมที่เฉพาะเจาะจงใน ctDNA ได้รับการรับรองโดยแนวทางทางคลินิกเพื่อคาดการณ์ประสิทธิภาพและติดตามการดื้อยาการทดสอบ ctDNA อาจเป็นเครื่องมือตรวจชิ้นเนื้อของเหลวที่มีประโยชน์มากที่สุดสำหรับการตรวจคัดกรองในระยะเริ่มต้นCTCs ยังมีบทบาทสำคัญในการคัดกรองกลุ่ม HCC ที่มีความเสี่ยงสูงในช่วงต้นเครื่องหมายต่างๆ ของ CTC ที่เกี่ยวข้องกับ HCC มีความสำคัญเป็นพิเศษในการโจมตี การพัฒนา และการกลับมาเป็นซ้ำของ HCCในฐานะที่เป็นถุงน้ำเมมเบรน เอ็กโซโซมมีส่วนเกี่ยวข้องในการสื่อสารระหว่างเซลล์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในเซลล์ HCCmicroRNAs ที่ไหลเวียนอยู่ในกระแสเลือด ดังนั้นจึงอาจมีประโยชน์มากกว่าสำหรับการตรวจคัดกรอง HCC ในระยะเริ่มต้นค่อยๆ ค้นพบโปรตีน exosomal และ exosome ที่อุดมด้วย RNA และยืนยันประสิทธิภาพการคาดการณ์สำหรับ HCCที่น่าสนใจ สาเหตุที่แตกต่างกันของ HCC อาจเกี่ยวข้องกับการกลายพันธุ์ที่แตกต่างกันด้วย ดังนั้นเราจึงสามารถเลือกไบโอมาร์คเกอร์ที่แตกต่างกันสำหรับการตรวจคัดกรองในระยะเริ่มต้นโดยพิจารณาจากสาเหตุที่แตกต่างกันของ HCC120
อย่างไรก็ตาม เทคนิคการตรวจชิ้นเนื้อของเหลวในปัจจุบันมีข้อสงสัยในแง่ของความเสถียร และไม่สามารถทำการคัดกรองล่วงหน้าหรือติดตาม HCC ได้อย่างอิสระ แต่ยังสามารถเสริมการตรวจคัดกรองและวินิจฉัยแต่ละบุคคลได้121 ในฐานะรูปแบบของการตรวจชิ้นเนื้อของเหลว การตรวจหาและการถ่ายภาพของ ctDNA, CTC, cfRNA และ AFP ที่เกี่ยวข้องกับ exosome หรือ PIVKA-II มีแนวโน้มที่ดีในการวินิจฉัยเบื้องต้นและการพยากรณ์โรคของ HCCอย่างไรก็ตาม กลไกที่แน่นอนของการปล่อย ctDNA เข้าสู่กระแสเลือดยังคงต้องอธิบายอย่างชัดเจนการเปิดเผยคุณสมบัติทางชีวภาพพื้นฐานของ ctDNA อาจช่วยให้ใช้เป็นเครื่องหมายได้ง่ายขึ้นctDNA จำนวนเล็กน้อยในการหมุนเวียนและข้อกำหนดในการจัดการตัวอย่างที่เข้มงวดเป็นความท้าทายสำหรับการใช้งานทางคลินิกของการตรวจหา cDNA ใน HCCนอกจากนี้ การกลายพันธุ์ทางพันธุกรรมไม่ได้มีลักษณะเฉพาะที่ช่วยให้สามารถระบุสารก่อมะเร็งได้อย่างแม่นยำเนื่องจากการแปรผันของยีนและโซมาติกหลายแบบยังมีอยู่ในเนื้อเยื่อปกติ การกลายพันธุ์ทางพันธุกรรมที่ระบุโดยการตรวจชิ้นเนื้อของเหลวอาจมีประโยชน์อย่างจำกัดในการตรวจคัดกรองเบื้องต้นสำหรับ HCC122 ข้อจำกัดของยีนเป้าหมายและไบโอมาร์คเกอร์ที่มีประโยชน์ที่กำหนดไว้อย่างดีที่ช่วยแยกแยะ cDNA จาก DNA ที่ไม่ใช่เนื้องอก เป็นปัญหาที่สำคัญที่สุดในการใช้ cDNAขาดประโยชน์ของเครื่องหมายที่ละเอียดอ่อนและเฉพาะเจาะจงสำหรับการตรวจจับ CTCพบเฉพาะเซลล์ที่มีชีวิตซึ่งมีศักยภาพในการแพร่กระจาย และการรวมที่เหมาะสมของเครื่องหมายที่อุดมด้วย CSC นั้นไม่ชัดเจนการแยก CTC เพื่อวัฒนธรรมและการประเมินโปรไฟล์การกลายพันธุ์ก็เป็นงานที่ท้าทายเช่นกันเนื่องจากปัญหาเกี่ยวกับการระบุ การแยก และการทำให้บริสุทธิ์ของ exosomes กลไกระดับโมเลกุลจำเพาะจึงยังไม่ชัดเจน และการศึกษาก่อนหน้านี้เกี่ยวกับกลไกของ exosomes และ HCC ยังไม่มีข้อมูลเชิงลึก และวิธีที่ miRNAs, lncRNAs และโปรตีนถูกจัดเรียงเป็น exosomes และไม่ชัดเจนว่าการรับ exosome เป็นกระบวนการประเภทเฉพาะหรือไม่การใช้ exosomes ในการวินิจฉัยและรักษา HCC ยังคงอยู่ในขั้นพรีคลินิกการขาดมาตรฐานของขั้นตอนการตรวจชิ้นเนื้อของเหลว เช่น ชนิดของหลอดที่ใช้ในการเก็บเลือด ปริมาณเลือด การเก็บตัวอย่างและการตรวจจับ การแยกและการทำให้สมบูรณ์ อาจขัดขวางการใช้งานในการปฏิบัติทางคลินิกตามปกติเนื่องจากความแตกต่างในการปฏิบัติในศูนย์การแพทย์ประสิทธิภาพของการตรวจชิ้นเนื้อของเหลวในการคัดกรองในระยะเริ่มต้น การวินิจฉัย การประเมินประสิทธิภาพ และการทำนายของ HCC ยังคงต้องได้รับการสำรวจ โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับกลุ่มที่มีความเสี่ยงสูงเทคโนโลยีการตรวจชิ้นเนื้อของเหลวมีศักยภาพที่ดีและคาดว่าจะใช้กันอย่างแพร่หลายในการปฏิบัติทางคลินิกของมะเร็งตับในอนาคตอันใกล้
1. Sung H. , Furley J. , Siegel RL และคณะสถิติมะเร็งทั่วโลกปี 2020: GLOBOCAN ประมาณการอุบัติการณ์และอัตราการเสียชีวิตจากมะเร็ง 36 ชนิดใน 185 ประเทศซีเอ มะเร็ง เจ คลินิก2021;71(3):209-249.ดอย: 10.3322/caac.21660
2. สำนักงานใหญ่คณะกรรมการสุขภาพแห่งชาติเกณฑ์การวินิจฉัยและรักษามะเร็งตับระยะแรก (ฉบับที่ ๒๐๒๒) [J]วารสารโรคตับทางคลินิก, 2022, 38(2): 288-303.ดอย: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z และอื่น ๆแนวทางการวินิจฉัยและรักษามะเร็งตับ (ฉบับปี 2562)มะเร็งตับ.2020;9(6):682-720.ดอย: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K และอื่น ๆแนวปฏิบัติทางคลินิกสำหรับมะเร็งตับ: สมาคมโรคตับแห่งประเทศญี่ปุ่น พ.ศ. 2560 (แนวทางที่ 4 ของ JSH-HCC) การปรับปรุง พ.ศ. 2562อ่างเก็บน้ำโรคตับ2019;49(10):1109–1113.ดอย:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA การตรวจชิ้นเนื้อของเหลวในโรคตับเรื้อรังแอน เฮปาโต.2021;20:100197.ดอย:10.1016/j.aohep.2020.03.08
6. ต่าย ตคิว, ตัน ป.ค.การตรวจชิ้นเนื้อมะเร็งเต้านมเหลว: การทบทวนที่เน้นห้องปฏิบัติการ Arch Pathol2021;145(6):678–686.ดอย: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F. , Singal AG การเฝ้าระวังมะเร็งตับ: แนวทางปฏิบัติที่ดีที่สุดในปัจจุบันและทิศทางในอนาคตระบบทางเดินอาหาร.2019;157(1):54-64.ดอย:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. European Research Association L, European Organization R, C Therapeutics.แนวทางทางคลินิก EASL-EORTC: การรักษามะเร็งตับเจ เฮปาริน.2012;56(4):908–943.ดอย:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G. , Ha SA, Kim HK และคณะการวิเคราะห์แบบผสมผสานของ AFP และ HCCR-1 เป็นตัวบ่งชี้ทางซีรัมวิทยาที่เป็นประโยชน์ในมะเร็งตับขนาดเล็ก: การศึกษาในอนาคตดิสมาร์ค.2012;32(4):265–271.ดอย: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S และอื่น ๆการแสดงออกที่แตกต่างกันของ microRNA-125b ในพลาสมาในโรคตับที่เกี่ยวข้องกับไวรัสตับอักเสบบีและศักยภาพในการวินิจฉัยของมะเร็งตับที่เกิดจากไวรัสตับอักเสบบีอ่างเก็บน้ำโรคตับ2017;47(4):312-320.ดอย:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F. , Kudo M. et al.ชีววิทยาและความสำคัญของ alpha-fetoprotein ในมะเร็งตับตับอ่อน2019;39(12):2214–2229.ดอย: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N และอื่น ๆแนวทางทางคลินิกสำหรับการรักษามะเร็งตับในภูมิภาคเอเชียแปซิฟิก: อัปเดต 2017องค์การระหว่างประเทศว่าด้วยโรคตับ.2017;11(4):317–370.ดอย: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei และคณะค่าการวินิจฉัยของซีรั่ม PIVKA-II เพียงอย่างเดียวหรือร่วมกับ AFP ในผู้ป่วยจีนที่เป็นมะเร็งตับดิสมาร์ค.2021;2021:8868370.ดอย: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L. , Praradines A. , Basset S. et al.มะเร็งปอดที่ไม่ใช่เซลล์ขนาดเล็ก การตรวจชิ้นเนื้อของเหลวในร่างกายที่ไม่ใช่พลาสมา: ใกล้ชิดกับเนื้องอก!เซลล์2020;9(11).ดอย: 10.3390/เซลล์9112486
15. Mader S, Pantel K. การตรวจชิ้นเนื้อของเหลว: สถานะปัจจุบันและแนวโน้มในอนาคตการรักษา Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.ดอย: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P และอื่น ๆการตรวจชิ้นเนื้อมะเร็งด้วยของเหลว: เครื่องมือวินิจฉัยต่อเนื่องหลายรูปแบบในด้านเนื้องอกวิทยาทางคลินิกAdv Med Oncol2018;10:1758835918794630.ดอย: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P. , Metais P. กรดนิวคลีอิกในพลาสมาของมนุษย์CR Seances Soc จิตเวช Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM และอื่น ๆการตรวจจับขั้นสูงของ DNA เนื้องอกที่ไหลเวียนโดยการวิเคราะห์ขนาดชิ้นส่วนวิทยาศาสตร์แปลยา2018;10:466.ดอย:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. และคณะความยาวของชิ้นส่วนดีเอ็นเอของเนื้องอกหมุนเวียนยีน PLOS2016;12(7):e1006162.ดอย:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. DNA เนื้องอกหมุนเวียน: biomarker ที่มีแนวโน้มในการตรวจชิ้นเนื้อมะเร็งที่เป็นของเหลวเนื้องอกเป้าหมาย2016;7(30):48832–48841.ดอย:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S. , Sauzen M. , Leary RJ และคณะการตรวจหา DNA เนื้องอกที่ไหลเวียนในระยะเริ่มต้นและระยะหลังของมะเร็งในมนุษย์วิทยาศาสตร์แปลยา2014;6(224):224ra24.ดอย:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. การตรวจชิ้นเนื้อของเหลวสำหรับการวิเคราะห์การทำนายการกลายพันธุ์ของมะเร็งที่เป็นของแข็ง: มุมมองของนักพยาธิวิทยาเจ ไบโอเทคโนโลยี.2019;297:66-70.ดอย: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T และอื่น ๆการตรวจหาเนื้องอกในระยะแรกโดยการตรวจคัดกรอง DNA ในพลาสมา: โฆษณาหรือความหวัง?กฎหมายทางคลินิกของเบลเยี่ยม2020;75(1):9-1 ดอย:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. ผลของไวรัสตับอักเสบและการแก่ชราต่อ DNA methylation ในการเกิดมะเร็งตับในมนุษย์จุลพยาธิวิทยา2010;25(5):647–654.ดอย: 10.14670/HH-25.647